Forum Aski - Türkiye'nin En Eğlenceli Forumu
 

Go Back   Forum Aski - Türkiye'nin En Eğlenceli Forumu > Eğitim - Öğretim > Dersler > Biyoloji
facebook bağlan


PCR’ ın temel bileşenleri

Biyoloji kategorisinde açılmış olan PCR’ ın temel bileşenleri konusu , PCR’ ın temel bileşenleri 1- Çoğaltılacak DNA bölge 2- Çoğaltılacak bölgeyi kopyalayacak olan DNA Polimeraz enzimi, 3- Yeni zincirin yapımında kullanılacak olan deoksinükleotid trifosfatlar, 4- DNA Polimeraz enzimi için gerekli ...


Yeni Konu aç  Cevapla
 
LinkBack Seçenekler Arama Stil
Alt 06.04.2014, 15:55   #1 (permalink)

Kullanıcıların profil bilgileri misafirlere kapatılmıştır.
Standart PCR’ ın temel bileşenleri



PCR’ ın temel bileşenleri

1- Çoğaltılacak DNA bölge
2- Çoğaltılacak bölgeyi kopyalayacak olan DNA Polimeraz enzimi,
3- Yeni zincirin yapımında kullanılacak olan deoksinükleotid trifosfatlar,
4- DNA Polimeraz enzimi için gerekli olan kimyasal ortamı sağlayan tampon sistemi.


1. Kalıp DNA:
PCR için her türlü kaynaktan temin edilen DNA (veya RNA) kullanılabilir. Çoğaltılacak kalıp DNA’nın diziliminin tam bilinmesi gerekmez. Bir PCR için başlangıç materyali, çoğaltılacak olan baz dizisine sahip genetik materyaldir. Eğer çoğaltılacak materyal olarak RNA’dan faydalanılacaksa, Reaksiyon başlamadan önce RNA, komplementer DNA’ya (cDNA) çevrilir ve sonra da bu cDNA, PCR için bir kalıp olarak görev yapar ve reaksiyona aynen DNA’daolduğu gibi Taq Polimeraz enziminin ortama ilavesiyle devam edilir.

2.Primerler (Oligonükleotidler):
Sentez için basamak oluşturan, DNA’yı PCR tekniği ile çoğaltabilmek için kullanılan, kalıp DNA ile eşleşecek 20-40 bazlık sentetik oligonükleotidlere primer denir. Primerler, denatüre edilmiş DNA molekülünün iki zinciri birbirinden ayrı durumda iken, bu zincirlerin herhangi bir bölgesine komplementler özellikteki küçük bir yabancı DNA parçası eklenirse, bu yabancı DNA dizisi ilgili zincirin tamamlayıcısı olduğu bölgeye yapışır ve bu olaya da hibridizasyon denir

3. Polimeraz Enzimleri:
PCR’ın kullanılmasını sağlayan en önemli faktör enzim DNA polimerazın (Taq Polimeraz) optimum çalışma ısısı 72ºC’dir. 97ºC’ye kadar dahi dayanabilen bu enzim,reaksiyon başlamadan önce ortama ilave edilir ve çoğalma döngülerinin tam bir serisinde aktif olarak reaksiyonu sonlandırabilir.
4. Deoksinukleotid Trifosfot (dNTP) Karışımı:
Nükleik asit ya da yeni DNA sarmallarının sentezlenebilmeleri için; dATP, dTTP, dGTP, dCTP olarak bilinen 4 tip deoksinükleotidtrifosfata (dNTP) gereksinim duyulmaktadır.
5. Mg+2:
Mg iyonu, primer ile DNA arasındaki bağlanmayı ve DNA polimerazın kalıp-primer kopleksi ile birleşerek oluşturduğu replikasyon kompleksini stabilize eder. Mg+2 konsantrasyonu dNTP konsantrasyonundan fazla olmalıdır. Önerilen konsantrasyon aralığı 1-4mM’dır.
6. Tampon çözeltiler:
PCR için uygun tampon 10-50mM arasında değişen Tris HCL’dir. TrisHCl tamponun pH’sı ise 8,3-8,8 arasında değişir. Bu tampona 50mM’lık KCL çözeltisi eklenmesi primerlerin yapışmasını kolaylaştırır. PCR’da kullanılan standart solüsyonlar kısaca; Tris, KCI, MgCl2, Jelâtin ve Tween 20 olarak sıralanabilir.

__________________



Jade isimli Üye şimdilik offline konumundadır Alıntı ile Cevapla
Cevapla

Yukarı'daki Konuyu Aşağıdaki Sosyal Ağlarda Paylaşabilirsiniz.


(Tümünü Görüntüle Konuyu Görüntüleyen Üyeler: 1
Jade
Seçenekler Arama
Stil

Yetkileriniz
Konu Açma Yetkiniz Yok
Cevap Yazma Yetkiniz Yok
Eklenti Yükleme Yetkiniz Yok
Mesajınızı Değiştirme Yetkiniz Yok

BB code is Açık
Smileler Açık
[IMG] Kodları Açık
HTML-Kodu Kapalı
Trackbacks are Açık
Pingbacks are Açık
Refbacks are Açık


Forum hakkında Kullanılan sistem hakkında
Forumaski paylaşım sitesidir.Bu nedenle yazılı, görsel ve diğer materyaller sitemize kayıtlı üyelerimiz tarafından kontrol edilmeksizin eklenmektedir.Bu nedenden ötürü doğabilecek yasal sorumluluklar yazan kullanıcılara aittir.Sitemiz hak sahiplerinin şikayetleri doğrultusunda yazılı, görsel ve diğer materyalleri 48 saat içerisinde sitemizden kaldırmaktadır. Bildirimlerinizi bu linkten bize yapabilirsiniz.

Telif Hakları vBulletin® Copyright ©2000 - 2016, ve Jelsoft Enterprises Ltd.'e Aittir.
SEO by vBSEO 3.6.0 PL2 ©2011, Crawlability, Inc.

Saat: 17:03