Klonlama

[Jade]

Klonlama

Gen klonlama: Bir genin birçok
kopyasının oluşturulmasını ve
izolasyonunu ifade eder.
 Bir genin klonlanması için gerekli
laboratuar yöntemleri 1970’lerde
bulunmuştur. Bu tekniklerin
geliştirilmesiyle bulunan yöntemler hücre
biyologları, biyokimyacılar, bitki
biyologları ve mikrobiyologlar tarafından
kullanılmıştır. İlk geliştirilen klonlama yöntemi hücre-tabanlı
klonlama olarak bilinir ve klonlanmış DNA
yaratmak için çok yaygın olarak kullanılır.
 En yaygın kullanılan prokaryotik konak, K12
olarak bilinen E.coli’nin bir laboratuar
suşudur. Klonlamanın temel basamakları şu şekildedir;
 Klonlanacak DNA, doku ya da hücrelerden
izole edilir.
 Restriksiyon enzimleri kullanılarak özgül DNA
parçaları elde edilir. Bu enzimler, DNA’yı
özgül dizilerinden tanır ve keser.
 Oluşturulan bu DNA parçaları vektör adı
verilen DNA molekülleriyle birleştirilir.




 Rekombinant DNA molekülü, bir konak
hücreye aktarılır. Konakta molekül kendini
eşler ve düzinelerce kopyası oluşur. Klonlanmış DNA konak hücrelerden izole
edilip incelenebilir, transkripsiyona
uğratılabilir, mRNA’sı translasyona
sokulabilir ve kodlanan gen ürünü izole
edilerek araştırma için ya da ticari amaçlarla
satılmak için kullanılabilir

[Jade]

Klonlanan genlerin potansiyel kullanımı 2
genel kategoride toplanır :
Protein ürünü elde etmek
Genin çok sayıda kopyasını hazırlamak Kopyalanacak olan DNA parçaları
konak hücresine doğrudan giremezler.
Ancak, restriksiyon enzimiyle kesilmiş
bir DNA parçası “vektör” adı verilen
başka bir DNA molekülü ile birleşirse
konak hücreye girebilir.